作為生命活動的主要承擔(dān)者,蛋白質(zhì)一直是人們研究的熱點。依據(jù)其物理、化學(xué)及生物學(xué)特征,已有多種分離手段,如沉淀法、超濾法、電泳法、層析法等。其中,液相色譜技術(shù)由于重復(fù)性好、分辨率高等優(yōu)勢在蛋白質(zhì)分離中得到廣泛應(yīng)用,下面介紹四種分離模式及對應(yīng)色譜柱。
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一、反相(RPC)
反相HPLC靈敏、通用性強,能夠分離結(jié)構(gòu)近乎相同的蛋白質(zhì)。ACE反相色譜柱采用含極低金屬離子雜質(zhì)的超惰性硅膠制成,使用極低濃度離子對試劑依然可以維持良好的峰形。
二、體積排阻(GFC/SEC)
體積排阻色譜,也被稱為凝膠色譜,是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物最有效的方法之一。Galaxy系列體積排阻色譜柱基于獨有的表面修飾技術(shù),在高純度硅膠基質(zhì)上鍵合一層均勻、親水、納米厚度的中性聚合物薄膜,適合分離蛋白藥物(人血白蛋白、免疫球蛋白、HGH、EPO 等)。
三、離子交換(IEC)
離子交換色譜,是根據(jù)蛋白質(zhì)分子在一定PH值和離子強度條件下所帶電荷的差異進行分離的方法。Madex 系列離子交換色譜柱以聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)顆粒為填料,并在其表面鍵合有一層高度親水的納米厚度的中性聚合物薄膜,最后再將離子交換官能團致密、均勻地鍵合在親水表面而制成。四種固定相互補,其中,WCX 固定相是專為抗體分離而設(shè)計。
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四、疏水作用(HIC)
疏水作用色譜,在保持蛋白活性前提下,是根據(jù)分子表面疏水性差異分離蛋白質(zhì)的方法。Madex HIC-B 疏水作用色譜柱是以聚苯乙烯/二乙烯基苯(PS/DVB)為基質(zhì),通過獨有的化學(xué)鍵合技術(shù)將丁基均勻、致密地鍵合在基質(zhì)表面而制成。這種無孔單分散的疏水填料特別適合于分離單克隆抗體、抗體偶聯(lián)物(ADC)及具有疏水性差異的蛋白片段等。
總結(jié)
色譜技術(shù)已發(fā)展成一種強大的分離技術(shù),能夠分離大量蛋白質(zhì),但是任何一種單獨的色譜技術(shù)無法完全滿足實驗和生產(chǎn)的需要。因此,多種色譜技術(shù)的結(jié)合使用已成為蛋白質(zhì)分離的一種普遍方法。