重要的是要認(rèn)識(shí)到色譜柱的選擇性和柱效是獨(dú)立的變量,在開發(fā)分離方法時(shí)您不必選擇使用一種而不使用另一種。事實(shí)上,為了實(shí)現(xiàn)最佳的總體分離效果,您應(yīng)當(dāng)對(duì)上述兩個(gè)變量以及保留值進(jìn)
行優(yōu)化。當(dāng)需要實(shí)現(xiàn)高速分離時(shí)尤其如此。(參見(jiàn)圖7)
圖 7:利用柱效和鍵合相選擇性來(lái)開發(fā)更快的分離方法
條件:
流動(dòng)相:
A = 5mM甲酸(0.189)ml / L;
A = 5mM甲酸(溶于甲醇中)
柱溫:40℃
檢測(cè):PDA, 254nm
樣品:
1. 阿司匹林
2. 非那西丁
3. 1,3-二硝基苯
4. 苯甲酸乙酯
5. 尼美舒利
6. 布洛芬
7. 吲哚美辛
利用UHPLC色譜柱更高的柱效,可在更高的流動(dòng)相流速下使用更短的色譜柱,以使這種混合物的分離時(shí)間縮短80%(相比HPLC色譜柱)。
然而,也可以通過(guò)優(yōu)化鍵合相的選擇性來(lái)進(jìn)一步縮短分離時(shí)間,在這個(gè)案例中,就是利用了C18-PFP鍵合相所具有的增強(qiáng)的選擇性。
與C18UHPLC色譜柱、C18 HPLC色譜柱相比,ACE Excel C18-PFP UHPLC色譜柱分別將混合物的分離時(shí)間縮短了80%以上以及96%,同時(shí)保持了所有峰的極佳分離度。
ACE Excel UHPLC色譜柱的設(shè)計(jì)旨在充分利用低擴(kuò)散、超高壓UPLC®和UHPLC儀器(高達(dá)1000 bar),并可與所有市售UPLC和UHPLC系統(tǒng)相兼容。
ACE Excel UHPLC色譜柱可以為堿性化合物提供更佳的峰形,改善柱子與柱子之間的重現(xiàn)性,提供額外的利用多種分離機(jī)制的固定相,以及改善色譜柱的耐用性。
ACE Excel UHPLC色譜柱的可用性意味著色譜分析師在使用UPLC和UHPLC儀器時(shí)有更多的選擇來(lái)獲得更好的結(jié)果。
圖 8:ACE Excel色譜柱提供快速、高分辨率的分離
條件
色譜柱:ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm
流動(dòng)相:60秒內(nèi)從30%B至100%B
A =水+ 0.1%TFA B =乙腈
流速:2.5 mL/min
柱溫:40oC
壓力:703 bar (10,335 psi)
檢測(cè):PDA, 254 nm
儀器:安捷倫1290 UHPLC
化合物
1. 乙酰苯胺
2. 苯乙酮
3. 苯丙酮
4. 苯丁酮
5. 二苯甲酮
6. 苯戊酮
7. 苯己酮
8. 苯庚酮
9. 苯辛酮
ACE Excel C18色譜柱可在不到60秒內(nèi)提供這9種分析物的基線分離。