峰拖尾可以降低分離度,降低靈敏度,甚至干擾準(zhǔn)確度和精密度(圖4)。
峰拖尾有許多潛在的原因,但分離堿性物質(zhì)時(shí)的主要原因是硅膠固定相載體顆粒表面上的酸性硅醇基與分析物上的氨基之間的相互作用(圖5)。
圖 4:峰拖尾對(duì)分離度和靈敏度的影響
隨著峰拖尾(Tf,拖尾因子)從1.0增加到2.0,分離度(Rs)從1.5下降到0.87。
由于峰寬增加以及峰面積保持不變,靈敏度(峰高)也隨著峰拖尾的增加而下降。
ACE色譜柱采用具有極低硅醇活性的超惰性硅膠制成。
這種超純硅膠采用專利技術(shù)進(jìn)行有效鍵合和徹底封尾。
導(dǎo)致這種硅膠基質(zhì)的固定相幾乎消除了硅醇基對(duì)色譜分離的不利影響。
ACE色譜柱的超惰性特性使其成為分離極性堿性化合物的理想選擇。
當(dāng)分離復(fù)雜堿性化合物時(shí),與其他現(xiàn)代堿性去活色譜柱相比,ACE色譜柱總是能給出明顯更好的峰形和柱效(圖6)。
圖 5:峰拖尾相互作用
硅膠固定相載體表面上的酸性硅醇基可形成與堿性化合物相互作用的離子交換位點(diǎn)。
這種離子交換的相互作用通??梢詫?dǎo)致峰保留(二次保留),并當(dāng)采用反相HPLC分離胺類化合物時(shí)引起峰拖尾。
一種幾乎消除了硅醇基對(duì)色譜分離不利影響的硅膠基質(zhì)固定相
圖 6:峰拖尾比較
條件
色譜柱尺寸:50 x 2.1 mm
流動(dòng)相:40%甲醇,60%水
流速:0.2 mL/min
溫度:22oC
樣品:吡啶
報(bào)告了堿性化合物(吡啶)在各種常見C18色譜柱上的塔板數(shù)。
在10%峰高下測(cè)量塔板數(shù),以使峰拖尾納入在測(cè)量中。
ACE C18-PFP由于其超惰性性質(zhì)而達(dá)到了最高塔板數(shù)。