n 固定相規(guī)格
n 依據(jù)相對疏水性進(jìn)行相比較
n 中性化合物的柱效比較
n 依據(jù)金屬活性進(jìn)行相比較
n 依據(jù)硅醇活性進(jìn)行相分組
n 堿性化合物的柱效比較
n 依據(jù)硅醇活性和惰性進(jìn)行相分類
引言
有多種不同的 C18 色譜柱可供選擇,但為特定分離找到合適的色譜柱可能非常耗時且價格昂貴。
兩種明顯相似的 C18 相可以產(chǎn)生極為不同的結(jié)果。
例如,圖 1 比較了在相同流動相條件下相同樣品混合物在Hypersil HyPURITY C18 和Symmetry C18 色譜柱上的分離結(jié)果。
即使 2 種色譜柱均裝有“新一代”C18 固定相,峰之間的帶間距(選擇性)仍極為不同。
圖 1
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Symmetry C18 和 Hypersil HyPURITY C18 都是新一代固定相。你將期望他們提供相似的性能, 在某些情況下確實如此。然而,在這里給出的例子中,您可以看到峰保留時間、選擇性、甚至峰形的差異。
沒有更多的信息,不可能預(yù)測將如
何比較不同固定相的性能。
C18 反相 HPLC 色譜柱的比較指南提供了常用 C18 色譜柱的基本比較信息,以幫助您在投入時間和金錢進(jìn)行色譜測試之前更輕松地識別相似點(diǎn)和差異。
希望這些信息可以幫助您更快地找到合適的色譜柱。
本指南中僅評估了硅膠基質(zhì) C18鍵合相。
不包括其他鍵合相,如C8、CN、苯基和極性嵌入相。
本指南不會標(biāo)識整體“最佳”色譜柱。最適合某一應(yīng)用的色譜柱不一定在其他應(yīng)用中也最有效。
而且,肯定沒有一個單一色譜柱最適合所有應(yīng)用。
但是,本指南可幫助您識別性能良好的色譜柱,使您至少可以縮小色譜測定中的色譜柱數(shù)量。
您可能會發(fā)現(xiàn)本指南有助于您識別可以提供良好分離和性能的多個色譜柱。一直以來,人們總是希望為某一應(yīng)用確定一種以上色譜柱,特別是當(dāng)您正在進(jìn)行常規(guī)分析時。
越來越多的色譜學(xué)家正尋求識別適合于其分析的替代品牌的HPLC 色譜柱。
為某一方法選擇替代色譜柱可以降低由于色譜柱問題(如從一個生產(chǎn)批次到另一個生產(chǎn)批次的選擇性變化或供應(yīng)商交貨遲緩)而導(dǎo)致“停工時間”的風(fēng)險。當(dāng)替代某一方法時,尋找一種替代或備用色譜柱(將提供可接受選擇性和性能)可能與尋找用于開發(fā)初始分離方法的正確色譜柱的花費(fèi)和耗時一樣。
我們希望本指南通過識別具有相似色譜特征的色譜柱,來使此工作更加容易。
固定相規(guī)格
固定相規(guī)格提供了有助于確定選擇哪些相進(jìn)行評估的基本信息。
例如,具有高表面積和高碳載量的相對疏水性化合物的保留通常要長于具有低表面積和低碳載量的相。
如果您正在分析大分子(如肽類和蛋白質(zhì)),則大孔徑(200-300?)相通常比小孔徑相更能提供良好的性能。
新型高純度硅膠通常比較老的、更具酸性的硅膠更能為堿性化合物提供良好的峰形(參見圖2)。
然而,固定相規(guī)格不會給您提供足夠的信息來準(zhǔn)確預(yù)測保留值或帶間距(選擇性)。
當(dāng)分離極性化合物時尤其如此。
圖 2
高純度硅膠為堿性化合物提供更佳的峰形
陽離子化合物和硅膠固定相載體表面上的酸 性硅醇位點(diǎn)之間的相互作用可以造成滯留和 峰拖尾。
通??梢灶A(yù)期用高純度硅膠(較少酸 性硅膠)制備的相可以為堿性化合物提供更佳 的峰形。