層析柱上樣量的確定主要由柱體積和所使用填料的載量來(lái)決定。

1. 柱體積（CV）：指的是層析柱中裝填的填料的總體積，這可以通過(guò)層析柱的截面積及填料裝填的高度來(lái)計(jì)算得到。
2. 載量：填料在一定條件下結(jié)合目的分子的能力，這分為靜態(tài)載量和動(dòng)態(tài)載量。靜態(tài)載量（有效載量）是在一定的條件下，可以結(jié)合在層析填料上的真實(shí)樣品的數(shù)量。這個(gè)數(shù)值是通過(guò)使用真實(shí)的樣品和介質(zhì)充分浸潤(rùn)飽和后，測(cè)定結(jié)合在填料上的樣品總量得到的。這個(gè)數(shù)值會(huì)受到pH、離子強(qiáng)度、添加劑以及樣品等因素的影響，實(shí)驗(yàn)條件改變，有效結(jié)合載量也會(huì)變化。動(dòng)態(tài)載量則是在一定的運(yùn)行條件下，可以結(jié)合在層析柱上的樣品數(shù)量。除了pH、離子強(qiáng)度、添加劑以及樣品，運(yùn)行流速也會(huì)影響動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。一般來(lái)說(shuō)，流速越低，動(dòng)態(tài)結(jié)合載量越高。如果流速接近于零，動(dòng)態(tài)結(jié)合載量等于有效載量。

在實(shí)際操作中，可以根據(jù)填料的動(dòng)態(tài)載量來(lái)確定上樣量。對(duì)于凝膠過(guò)濾層析，上樣量通常在柱床體積的5%以內(nèi)，根據(jù)樣品的性質(zhì)在0.5%\~5%之間適當(dāng)調(diào)整。對(duì)于離子交換/疏水層析，在捕獲及粗純階段，上樣量建議控制在柱吸附量（填料載量×柱床體積）的30%左右，最高不超過(guò)50%；在精純階段，上樣量建議在柱吸附量的60%左右，最高不超過(guò)80%。