App ID: FLM-S230001

GB 5009.35-2023

食品中合成著色劑固相萃取及檢測

一、實驗目的

本研究按照 GB5009.35-2023 標準，利用固相萃取法作為樣品的前處理，建立了固相萃取-高效液相色譜法測定食品中合成著色劑含量的方法， 樣品經(jīng)乙醇氨水提取后， 經(jīng) Polyclean X-WAX-S

150mg/6ml 小柱凈化， 采用高效液相色譜儀結(jié)合紫外檢測器測定。

二、實驗目標物

糖果等食品中合成著色劑

三、應用范圍

糖果等食品中合成著色劑的前處理與分析。

四、實驗材料

菲羅門 Polyclean X-WAX-S 小柱, 150mg/6mL(貨號：9B-P008-06150)。

注：乙醇氨水溶液配制，量取無水乙醇 700 mL，加入 4 mL 氨水，用水稀釋并定容至 1 L，混勻。

五、實驗方法

1、樣品提取

準確稱取樣品 2 g（精確至 0.001 g），置于 50 mL 具塞離心管中，加入 25 mL 乙醇氨水溶液（硬糖需要

先加入 2 mL 水超聲使其溶解），渦旋 1 min，50℃超聲提取 20 min，8000 轉(zhuǎn)/分鐘離心 5 min。

取上清液置于 50 mL 離心管中，殘渣中再加入 15 mL 乙醇氨水溶液重復提取 1 次，離心后合并上清液，

用乙醇氨水溶液定容至 50 mL，即得提取液。

準確吸取提取液 10 mL，50℃下氮氣濃縮至 2 mL 左右，分 2~3 次共加入 10 mL 5%甲醇水溶液溶解，作為待凈化液。

2、SPE 柱凈化

先依次用 6 mL 甲醇和 6 mL 水活化 Polyclean X-WAX-S 150mg/6ml 固相萃取柱，保持柱體濕潤，將待凈化液注入柱中，控制流出液流速在 1 滴/秒，棄去流出液。再依次用 6 mL 2%甲酸水和 6 mL 甲醇淋洗， 棄去淋洗液，抽干小柱。

最后用 6 mL 2%氨化甲醇洗脫，分兩次加入，收集洗脫液，于 50 ℃氮吹至近干。準確加入 2 mL pH=9 的乙酸銨溶液溶解，過 0.45 μm PTFE 濾膜，棄去 2~5 滴初濾液，取續(xù)濾液作為待測液。

3、HPLC 條件

色譜柱：菲羅門 SuperLu C18(2) 5u 250*4.6mm（貨號：FMG-5292-EONU) 流動相：A：20 mmol/L 乙酸銨溶液 B：甲醇

色譜方法：參照 GB 5009.35-2023 標準中一致的方法

六、實驗結(jié)果參考

七、注意事項

1）在使用乙醇氨水溶液提取時，需要提取兩次以上，提取一次可能會導致提取不充分，導致回收率偏低。

2）過 Polyclean X-WAX-S 小柱前確認樣液的 pH 值＜6，以便于合成著色劑目標化合物和填料更好的結(jié)合。

3）上機之前過濾所用的針式過濾器不能使用尼龍針式過濾器，會吸附部分合成著色劑，導致回收率偏低，     建議使用 PTFE 水系針式過濾器。4）在檢測赤蘚紅時，需要注意在使用離心管氮吹時會有少量的赤蘚紅會附著在離心管上，可以采用渦旋和     超聲的方法進行溶解，使用玻璃的氮吹管更易溶解；或者在溶解的時候加入一定量的甲醇便于赤蘚紅的溶解。