1. 色譜柱的安裝
1) 請將液相色譜裝置中的流動相完全置換后再連接色譜柱。
并且請完全排出流路內(nèi)的空氣。注意 裝置內(nèi)的液體和所使用的流動相不能相溶的情況下,請使用雙方都能相溶的液體做過渡。比如從水置換到氯仿的情況,就需要使用丙酮做過渡,才能完全置換。
注意:將鹽溶液置換成有機(jī)溶劑的時候,需要通過純水、丙酮的順序來進(jìn)行置換。相反,從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)換成鹽溶液的情況下,需要通過丙酮、純水的順序置換。
注意:不僅僅是泵,流動相流動的所有流路都必須進(jìn)行置換。例如,注入樣品的情況,軟管內(nèi)的液體也需要置換。另外,如果使用壓力計等別的軟管的情況,取下來的管子也必須由流動相洗凈后才能繼續(xù)使用。
2) 色譜柱保存方法不對或者長期不使用的情況下,色譜柱的出入口可能會有空氣殘留。這種情況下,必須先把空氣完全排出后才連接到裝置中。
注意:請避免快速加熱,并且注意加熱溫度不要超過色譜柱的最高負(fù)荷溫度。
參考:把柱子入口側(cè)的螺栓打開,然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了),等液體滿出來以后接到裝置上。然后,打開出口處的螺栓,用泵送液,等確認(rèn)出口處有液體流出后,連接到裝置中。這樣操作,就算后面再連接一根色譜柱也能完全除去空氣。
3) 請在泵運作的時候連接色譜柱。確保能讓流動相按照色譜柱上箭頭的方向流動的狀態(tài)連接色譜柱。
4) 色譜柱加溫使用的時候,先用0.2~0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達(dá)到所定溫度后,再漸漸的增加流量至測定流量。
5) 色譜柱需要安定時間。連接到裝置中立即進(jìn)行測試的情況下,第一次很難得到好的分析結(jié)果。
2. 色譜柱的取下和保存
1) 色譜柱加熱使用的情況下,先把流量下降到0.2~0.3mL/min,然后,繼續(xù)送液的同時慢慢的把色譜柱溫度降低到室溫。
2) 色譜柱溫度降低到室溫后,先停止泵,再把色譜柱從裝置中取下,擰緊兩端的螺栓。
注意:色譜柱購入時的封入液和流動相不同的情況,先用封入液置換,再取下色譜柱。
注意:為了不漏液,請擰緊色譜柱兩端的螺栓。
參考:室溫是指保管色譜柱的場所的溫度。
3) 色譜柱請放置于購入時的包裝盒內(nèi),放在溫度變化少的地方(恒溫室最適合)進(jìn)行保存。
4) GPC、GFC色譜柱長時間保存的情況下,推薦使用液浸保存的方法。
這種情況,把色譜柱的出口端從裝置上取下,連接上外徑1/16英寸、內(nèi)徑0.8mm、長50cm的特氟龍軟管。
然后啟動泵,特氟龍軟管的前端有流動相流出后停止泵,把特氟龍管的前端浸入含有80ml浸入液的容積為100ml的瓶中。
把色譜柱的入口端從裝置上取下,擰緊螺帽放置在溫度變化少的地方保存。
參考:液浸保存的時候,每個月一次,色譜柱中的溶劑用新的溶劑置換一下能更長的保持色譜柱的性能。
5)3天內(nèi)會再次使用的情況下,不需要吧色譜柱取下進(jìn)行保存。
注意:容易析出的鹽溶液,腐蝕性的溶劑作為流動相的情況下,除了1天以內(nèi)保存的情況外,都需要用流動相把鹽溶液和腐蝕性溶劑置換后保存。
3. 使用保護(hù)柱的建議
1) 樣品中含有易于吸收填充劑的物質(zhì)或者使用被污染的樣品時,色譜柱的性能可能會急劇降低。這種場合推薦使用保護(hù)柱。
參考:保護(hù)柱能長久保持分析柱的性能,但不能提高分離性能。
2) 保護(hù)柱應(yīng)根據(jù)樣品的性狀、注入量,定期更換。
4. 樣品的前處理
1) 一般情況下樣品先用將使用的流動相溶解。
參考:使用不穩(wěn)定的流動相的場合,在注入前取出流動相溶解樣品。特別是使用示差折光檢測器的時候,為了減小溶劑峰此操作非常重要。
注意:使用梯度法的時候,樣品要先在最初的流動相中溶解。
注意:樣品沒有在流動相中溶解前,請不要注入色譜柱。
2) 為了去除流動相中的雜質(zhì)和不溶物,請使用0.5μm的過濾器過濾。
3) 使用固相提取用過濾器能達(dá)到很好的前處理效果。
5. 流動相
1) 為了去除流動相中的雜質(zhì)和不溶物,請使用0.5μm的過濾器過濾。
2) 流動相請充分脫氣后使用。
流動相使用超聲波,利用抽氣泵減壓脫氣。流動相脫氣不完全就使用示差檢測器進(jìn)行檢測的時候,有可能會無法得到安定的基線。
注意:加溫色譜柱使用的情況,為了避免色譜柱內(nèi)部和出口產(chǎn)生氣泡,脫氣尤其重要。
6. 色譜柱的檢定方法
出庫時附帶的色譜柱檢定報告的理論塔板數(shù),是通過以下的方法求得的。
理論塔板數(shù)的測定條件請參考色譜柱的檢定條件。
圖表的繪制速度以每分鐘1.5~2.0cm為合適。調(diào)整檢測器的靈敏度使圖表上峰的高度在10cm左右。
7. 色譜柱的廢棄方法
廢棄的場合,請把色譜柱的內(nèi)容物(填充劑和流動相)取出,內(nèi)容物在焚燒爐中燒毀,把空的色譜柱丟棄。
8. 其他注意事項
注意 色譜柱收到?jīng)_擊可能會造成填充劑狀態(tài)改變從而導(dǎo)致色譜柱性能降低。請避免色譜柱從高處掉落。
注意 請不要彎曲色譜柱。
注意 打開色譜柱的終端部件可能會造成性能降低,絕對不要打開。
注意 開始啟動時和使用中,請避免急速的壓力和流量變化。為了延長色譜柱的壽命,請盡量使用配有減震器、或者沒有脈動的泵。